Biosekuriti merupakan suatu konsep dalam menjaga kesehatan ternak yang dapat mempengaruhi produksi ternak dan dikhususkan dalam meminimalisir resiko terhadap penyakit menular dan tidak menular. Biosekuriti ini salah satunya diterapkan pada ayam petelur yang merupakan unggas penghasil telur. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui tingkat penerapan 3 konsep biosekuriti ayam petelur serta lingkungan sekitar di Sangatta, Kabupaten Kutai Timur. Penelitian dilakukan di Sangatta, Kabupaten Kutai Timur dari bulan Desember 2022 sampai Febuari 2023. Teknik pengambilan sampel dilakukan dengan purposive sampling dengan pertimbangan tertentu minimal populasi 1000 ekor, usaha berjalan 2 tahun, memiliki pemahaman tentang biosekuriti, dan dalam masa produktif. Prosedur pengumpulan data dengan wawancara serta kuisioner untuk memberikan gambaran dari jawaban responden yang diberikan menggunakan skala likert. Dari jumlah responden yang diperoleh adalah 10 peternak. Penelitian menunjukan bahwa tingkat penerapan 3 konsep biosekuriti pada usaha ayam petelur di Sangatta, Kabupaten Kutai Timur yang meliputi biosekuriti konseptual, struktural, dan operasional berada pada persentase tertinggi 49,6% yakni kategori Cukup, hal lain yang menjadi sorotan adalah pada kategori kurang persentase sebesar 27,6% masih belum memahami tentang biosekuriti lebih tinggi bila dibandingkan dengan yang telah memahami pentingnya biosekuriti dengan baik hanya 22,6%.