Aklimatisasi merupakan tahap kritis dalam perbanyakan kultur jaringan, terutama bagi anggrek Dendrobium nindii. Penelitian ini bertujuan untuk mengamati pengaruh berbagai media tanam terhadap pertumbuhan vegetatif Dendrobium nindii, serta menentukan media tanam terbaik. Perlakuan terdiri dari lima jenis media tanam: arang kayu, akar pakis, sekam bakar, cocopeat, dan moss, dengan rancangan acak lengkap (RAL). Parameter yang diamati meliputi tinggi tanaman,panjang daun, jumlah daun, dan waktu muncul tunas selama 10 MST. Hasil penelitian menunjukkan bahwa media moss memberikan hasil terbaik untuk tinggi tanaman (6,35 cm), panjang daun (5,35 cm), dan waktu muncul tunas (0,17 tunas). Sementara itu, cocopeat menghasilkan jumlah daun terbanyak 5,27 helai). Media arang kayu memberikan hasil terendah pada semua parameter. Penelitian ini menyimpulkan bahwa media moss dan cocopeat merupakan media optimal untuk aklimatisasi Dendrobium nindii.