Nanopartikel perak (AgNPS) merupakan bagian dari nanoteknologi dengan keunggulan reaktivitas kimia rendah dan stabilitas yang tinggi. Biosintesis AgNPS dengan menggunakan ekstrak tanaman mempunyai keunggulan dibandingkan metode yang lain karena lebih sederhana dan ramah lingkungan. Bawang tiwai merupakan tanaman obat endemik Kalimantan yang kaya kandungan senyawa bioaktif, dalam bentuk kalus yang diperoleh dari teknik kultur jaringan dapat digunakan sebagai bahan pembuatan AgNPS. Studi ini bertujuan untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder pada ekstrak kalus bawang tiwai, mengetahui konsentrasi optimum perak nitrat pada stabilitas AgNPS ekstrak kalus bawang tiwai dan untuk mengetahui aktivitas antioksidan optimum pada ekstrak kalus dan AgNPS kalus bawang tiwai. Rancangan penelitian yang digunakan adalah rancangan acak lengkap dengan lima perlakuan, yaitu konsentrasi AgNO3 0, 0,5, 1, 1,5, dan 2 mM. Tahapan kerja yang dilakukan yaitu induksi kalus bawang tiwai, ekstraksi kalus dengan metode maserasi, uji metabolit sekunder, sintesis AgNPS kalus bawang tiwai dan uji aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhidrazil). Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak kalus bawang tiwai positif mengandung alkaloid, flavonoid, fenolik, saponin, dan triterfenoid. Konsentrasi AgNO3 1 mM merupakan konsentrasi yang paling stabil dalam membentuk AgNPS kalus bawang tiwai. Aktivitas antioksidan tertinggi terdapat pada AgNPS kalus bawang tiwai dengan nilai IC50 sebesar 48,148 ppm. Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa aktivitas antiokidan AgNPS kalus bawang tiwai lebih tinggi dibandingkan ekstrak kalus bawang tiwai.