Peningkatan konsumsi roti di Indonesia berbanding lurus dengan meningkatnya impor gandum. Perlunya solusi alternatif untuk mengurangi penggunaan tepung terigu dengan modifikasi pangan berbasis sumber daya lokal, yaitu modifikasi pangan dengan pemanfaatan singkong menjadi mocaf (Modified Cassava Flour). Dalam pembuatan produk roti dengan memanfaatkan mocaf memiliki karakteristik yang kurang baik, sehingga dibutuhkan penambahan bahan tambahan berupa bread improver untuk memperbaiki karakteristik dari roti yang dihasilkan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh penambahan bread improver terhadap nilai gizi dan total kalori roti manis yang disubstitusi mocaf sebesar 40%. Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) non faktorial terdiri dari 5 taraf perlakuan jumlah bread improver, masing-masing dengan 3 kali ulangan. Perlakuan jumlah bread improver dalam penelitian ini adalah sebagai berikut: 0 g, 0,2 g, 0,4 g, 0,6 g, dan 0,8 g. Data hasil uji dianalisis dengan menggunakan uji sidik ragam atau Analysis of Variance (ANOVA) dan jika hasil uji menunjukkan pengaruh nyata dari perlakuan, maka akan dilanjutkan dengan uji Duncan’s Multiple Range Test (DMRT). Penelitian ini menunjukkan bahwa penambahan bread improver memiliki pengaruh nyata terhadap kadar air, kadar abu, kadar protein, kadar karbohidrat dan total kalori, namun tidak berpengaruh terhadap kadar lemak roti manis substitusi mocaf. Roti manis substitusi mocaf 40% menghasilkan kadar air berkisar antara 15,40-20,36%, kadar abu 1,55-3,33%, kadar protein 9,07-10,02%, kadar lemak 11,19-11,58%, kadar karbohidrat 54,68-62,76%, dan total kalori 363,09-388,10 kkal. Selain meningkatkan gizi penambahan bread improver juga dapat menurunkan kadar karbohidrat dan total kalori roti manis substitusi mocaf, menurunnya total kalori roti manis substitusi mocaf sehingga menjadikannya alternatif roti yang lebih sehat. Penambahan bread improver sebanyak 0,8 g/100 g pada roti manis dengan campuran tepung terigu dan mocaf 60:40 menghasilkan roti yang dapat menyamai nilai gizi dan total kalori roti manis pembanding atau roti dengan 100% tepung terigu.