Biofilm adalah kumpulan mikroorganisme yang melekat pada permukaan dan dilindungi oleh matriks Extracellular Polymeric Substances (EPS). Salah satu bakteri yang menyebabkan penyakit infeksi adalah Streptococcus pyogenes. Daun bandotan diketahui mengandung alkaloid, flavanoid, saponin, dan tannin yang memiliki aktivitas antibakteri dan berpotensi sebagai antibiofilm. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibiofilm ekstrak daun bandotan (Ageratum conyzoides) terhadap bakteri Streptococcus pyogenes. Ekstrak daun bandotan diperoleh dengan cara maserasi menggunakan etanol 96% dan diperoleh ekstrak sebanyak 27,6 gram dan nilai rendemen 13,8%. Ekstrak daun bandotan dilakukan uji skrining fitokimia menggunakan metode tabung dan uji aktivitas antibiofilm menggunakan elisa reader dengan konsentrasi ekstrak 6,25%, 12,5%, dan 25%. Hasil penelitian ini menunjukkan ekstrak daun bandotan (Ageratum conyzoides) mengandung senyawa metabolit sekunder alkaloid, flavanoid, fenolik, tanin, terpenoid dan saponin. Hasil uji aktivitas antibiofilm menunjukkan adanya aktivitas antibiofilm dari ekstrak daun bandotan (Ageratum conyzoides) pada konsentrasi 6,25%, 12,5%, dan 25% terhadap bakteri Streptococcus pyogenes dalam menghambat pembentukan dan mendegradasi biofilm.