Kafein merupakan salah satu alkaloid yang terkandung dalam kopi. Kafein pada kopi memiliki efek farmakologis yang bermanfaat secara klinis, seperti merangsang sistem saraf pusat, menghilangkan rasa lelah dan mengantuk. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui validasi metode analisis pada penetapan kadar kafein dalam kopi robusta, dimana sampel yang digunakan adalah kopi yang berasal dari Kalimantan dan Sulawesi. Metode analisis yang digunakan untuk menetapkan kadar kafein dalam kopi adalah spektrofotometri UV-Vis. Parameter pada validasi metode yaitu linearitas, LOD dan LOQ, presisi, dan akurasi. Pengujian validasi yang dilakukan menunjukkan hasil yang linier dimana nilai r2 adalah 0,9927. Nilai limit deteksi (LOD) yang diperoleh adalah 25,9344 dan nilai limit kuantitas (LOQ) yang diperoleh adalah 78,5893. Hasil uji akurasi dinyatakan dalam %recovery yaitu 106,7%. Pada tahap akhir dilakukan uji presisi dimana hasil nilai RSD yang diperoleh adalah1,5937%. Pada penetapan kadar kafein diperoleh kadar kafein untuk kopi Sulawesi sebesar 0,466 mg/g dan untuk kopi Kalimantan sebesar 0,591 mg/g.