Kitosan merupakan salah satu bahan alam yang dikenal memiliki sifat biologis, salah satunya dapat menurunkan kadar kolesterol karena salah satu sifatnya yang dapat mengikat kolesterol. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas kitosan dari limbah cangkang kerang Asia (Corbicula fluminea) sebagai penurun kadar kolesterol secara in vitro. Kitosan dari cangkang kerang Asia didapatkan melalui 3 tahapan, yaitu deproteinasi menggunakan Natrium hidroksida, lalu demineralisasi menggunakan Asam klorida 1 N, dan deasetilasi menggunakan Natrium hidroksida. Metode penelitian ini yang digunakan adalah metode eksperimental dengan menggunakan pola Rancangan Acak Lengkap (RAL). Kadar kolesterol ditentukan dengan metode kolorimetri yang terdiri dari 7 perlakuan dan 3 replikasi. Hasil penelitian yang didapatkan untuk isolasi kitosan yaitu rendemen kitosan sebesar 83,5% dengan kadar abu sebesar 57,6%, dan derajat deasetilasi 84,55% dan dari kitosan tersebut didapatkan konsentrasi optimum kitosan cangkang kerang Asia (Corbicula fluminea) untuk menurunkan kadar kolesterol secara in vitro yaitu 70 mg ditunjukkan dengan persen penurunan kadar kolesterol sebesar 66,39% sehingga kitosan dari cangkang kerang Asia (Corbicula fluminea) memiliki aktivitas dalam menurunkan kadar kolesterol secara in vitro.