Latar Belakang: Menurut Riset Kesehatan Dasar pada tahun 2018 membuktikan bahwa masalah gigi di Indonesia khusus nya pada penderita karies mencapai 45,3% dan 48% dari provinsi Kalimantan timur. Karies gigi diawali ketika biofilm mikroba (plak) terbentuk pada permukaan gigi. Plak merupakan awal penting pembentukan karies. Bakteri yang berkembang biak pada plak menghasilkan asam yang mampu melarutkan gigi. Upaya mencegah karies dalam gigi dapat dilakukan menghilangkan akumulasi plak, yang diklaim juga menggunakan kontrol plak ketika biofilm mikroba (plak) terbentuk pada permukaan gigi. Pengendalian plak dapat dilakukan secara mekanis dengan sikat gigi dan secara kimiawi. Oleh karena itu, kontrol plak mekanis masih dianggap tidak cukup dan perlu penambahan agen antimikroba secara kimiawi pada produk perawatan kesehatan gigi Beberapa penelitian telah memberikan kelayakan pengunaan tanaman obat sebagai sumber agen terapi untuk pencegahan pada penyakit mulut. Tujuan Penelitian: Untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak tanaman sirih hitam terhadap pertumbuhan bakteri Streptococcus mutans secara in vitro. Metode Penelitian: Penelitian eksperimental dengan 12 kelompok uji yaitu perlakuan dengan konsentrasi 4%, 2%, 1%, 0,5%, 0,25%, 0,125%, 0,0625%, 0,0312%, 0,0156%, 0,0078%, 0,0039%, 0,0019%, kelompok kontrol positif (eugenol) dan kelompok kontrol negatif (DMSO) dengan metode mikrodilusi untuk melihat kadar hambat minimum (KHM) dan kadar bunuh minimum (KBM). Hasil Penelitan: Hasil penelitian menunjukan adanya aktivitas antibakteri ditandai dengan terdapatnya sumuran yang tidak berubah warna atau tetap jernih pada beberapa konsentrasi. Kesimpulan: Minyak atsiri sirih hitam memiliki kemampuan untuk menghambat dan membunuh pertumbuhan bakteri Streptococcus mutans.