Latar Belakang: Penyakit pulpa dan jaringan periapikal menduduki urutan ke-7 dari 10 besar penyakit terbanyak. Bahan alam yang secara empiris memiliki khasiat yang baik dan relatif aman untuk digunakan adalah propolis dari lebah. Tujuan: Untuk mengetahui efektivitas antibakteri ekstrak etanol propolis lebah kelulut (Heterotrigona itama) terhadap pertumbuhan bakteri saluran akar gigi secara in vitro. Metode: Penelitian ini merupakan eksperimental murni dengan posttest only control group design, terdiri dari 6 kelompok perlakuan yaitu konsentrasi 3.000 ppm, 6.000 ppm, 12.000 ppm, 24.000 ppm, kontrol positif dan kontrol negatif. Setiap perlakuan dilakukan pengulangan sebanyak 4 kali. Hasil: Terdapat zona bening pada konsentrasi 3.000 ppm, 6.000 ppm dan 12.000 ppm, sedangkan pada konsentrasi 24.000 ppm tidak terdapat zona bening. Kesimpulan: Ekstrak etanol propolis lebah kelulut (Heterotrigona itama) memiliki efektivitas antibakteri. Diameter zona hambat terbesar ditunjukkan pada konsentrasi 3.000 ppm.