Eurycoma longifolia Jack berasal dari keluarga Simaroubaceae banyak tumbuh tumbuhan endemik di Asia Tenggara. Di Indonesia timbuh di daerah Kalimantan dan Sumatera dikenal sebagai "Akar Pasak Bumi". Akar Pasak Bumi secara umum berfungsi sebagai Antimalaria dan penambah stamina. Tujuan dari penelitian ini adalah mengetahui golongan senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam Ekstrak Metanol dan Ekstrak partisi n-Heksan melalui skrining fitokimia dan teknik isolasi senyawa Alkaloid Partisi n-Heksan Akar Pasak Bumi. Pada penelitian ini dilakukan ekstraksi menggunakan metode refluks dengan pelarut metanol lalu dipartisi cair-padat dengan menggunakan pelarut n-Heksan, kemudian metode pemisahan senyawa menggunakan Kromatografi cair vakum (KCV) dan Kromatografi Kolom Konvensional (KK) dengan eluen gradien kemudian identifikasi tiap tahap pemisahan menggunakan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) lalu diamati di bawah sinar UV 245nm dan 366nm setelah itu disemprot pereaksi Dragendroff, lalu pemurnian dan uji kemurniaan dengan metode Kromatografi Lapis Tipis preparatif (KLTP) dan KLT 2 Dimensi kemudian dianalisis pada spektrofotometri UV-Vis dengan rentang 190-500nm. Hasil penelitian yaitu pada Ekstrak Metanol akar Pasak Bumi terkandung senyawa alkaloid, tanin, dan terpenoid dan pada partisi n-Heksan Akar Pasak Bumi terdeteksi senyawa metabolit sekunder golongan terpenoid dan alkaloid dan diperoleh 2 isolat yaitu B3.a dan B3.b teridentifikasi senyawa golongan Alkaloid berdasarkan hasil positif pada identifikasi KLT dengan penyemprotan pereaksi Dragendorff dan hasil analisis Spektrofotometer UV-Vis didapat puncak serapan maksimum pada panjang gelombang 228nm dan 236nm yang menunjukkan bahwa isolat tersebut adalah golongan alkaloid.