Peningkatan kasus Covid-19 akan terus terjadi jika protokol kesehatan tidak diterapkan dengan baik. Tidak hanya menurunkan tingkat produktivitas seseorang, tetapi dapat menimbulkan kematian, karena virus dapat menginfeksi sistem pernapasan ringan. Namun, dapat menyebabkan infeksi pernapasan berat, demam, batuk kering, dan sesak napas. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui hubungan pengetahuan, sikap dan tindakan terhadap penerapan protokol kesehatan dalam pencegahan penyebaran virus Covid-19 di wilayah kerja puskesmas Tanjung Selor. Jenis penelitian yang digunakan merupakan penelitian deskriptif analitik dengan pendekatan kuantitatif menggunakan desain penelitian cross sectional. Pengumpulan data menggunakan kuesioner dengan jumlah sampel responden 89 orang. Data dianalisis menggunakan uji chi-square. Hasil penelitian ini berdasarkan uji statistik dengan menggunakan uji chi square ditentukan nilai p pengetahuan dengan protokol kesehatan (p=0,000), sikap dengan protokol kesehatan (p=0,000), tindakan dengan protokol kesehatan (p=0,000). Ada hubungan antara pengetahuan, sikap, dan tindakan, dengan penerapan protokol kesehatan. Hasil penelitian ini disarankan bagi masyarakat sekitar Puskesmas Tanjung Selor agar lebih memperhatikan penerapan protokol kesehatan guna meminimalisir penyebaran Virus Covid-19.