Pendahuluan: Rutin menyikat gigi dan penggunaan benang gigi/ dental floss merupakan cara menjaga kesehatan gigi dan mulut. Pengetahuan dan sikap tentang dental floss dapat ditingkatkan dengan memberikan promosi kesehatan yang mampu memberi pemahaman berupa video penyuluhan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui Pengaruh Video Penyuluhan terhadap Pengetahuan dan Sikap tentang Dental floss Mahasiswa 2018-2020 Program Studi Kedokteran Gigi (PSKG) Fakultas Kedokteran Universitas Mulawarman. Metode: Jenis penelitian ini adalah eksperimen, desain penelitian yang digunakan Pre-Experimental Design dengan model desain One-Group Pre-Test Post-Test Design. Sampel penelitian adalah Mahasiswa Program Studi Kedokteran Gigi Fakultas Kedokteran Universitas Mulawarman Angkatan 2018-2020 dengan jumlah 95 Mahasiswa. Pengambilan sampel dilakukan dengan teknik purposive sampling. Metode pengumpulan data yang digunakan yaitu kuesioner, dokumentasi, dan observasi. Sedangkan untuk menganalisis data menggunakan uji t berpasangan. Hasil: Penelitian menunjukkan bahwa nilai rata-rata pengetahuan pre-test adalah 5,42 dan nilai rata-rata post-test adalah 6,16 sementara nilai rata-rata sikap tentang dental floss pretest adalah 49,32 dan nilai rata-rata posttest adalah 50,99, diperoleh nilai Sig. (2- tailed), yaitu 0.000 untuk pengetahuan dan 0,001 untuk sikap. Simpulan: Ada perbedaan pengetahuan, sikap sebelum dan sesudah diberikan penyuluhan video penyuluhan tentang dental floss serta ada Pengaruh Video Penyuluhan terhadap Pengetahuan dan Sikap tentang Dental floss Mahasiswa 2018-2020 Program Studi Kedokteran Gigi (PSKG) Fakultas Kedokteran Universitas Mulawarman.