Fungi Endofit adalah organisme yang hidup pada jaringan tumbuhan yang berpotensi menghasilkan metabolit sekunder yang sama dengan inanganya. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan Isolasi dan karakterisasi fungi endofit dari daun kopi Robusta (Coffea canephora). Pengumpulan data dilakukan dengan beberapa tahap, yaitu isolasi fungi endofit dengan metode sterilisasi permukaan (Sterilization surface), mengkarakterisasi fungi endofit secara konvensional yaitu dengan mengamati morfologi fungi endofit dan pengujian antimikroba dengan menggunakan metode difusi cakram. Hasil penelitian menunjukkan bahwa sebanyak 3 isolat fungi endofit berhasil diisolasi dari daun kopi Robusta (Coffea canephora) dengan karakteristik makroskopik berwarna putih, bentuk bulat dan permukaan halus dan karakteristik mikroskopik mempunyai hifa yang bercabang, hifa bersekat dan warna hifa yang hialin/transparant. Hasil pengujian antimikroba pada konsentrasi 2% dan 4% memiliki memiliki aktivitas antimikroba yang kuat pada Pseudomonas aeruginosa dan aktivitas sedang pada Staphylococcus aureus dan Candida albicans. Pada konsentrasi 6% memiliki aktivitas antimikroba yang sedang pada Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus dan aktivitas yang kuat pada Candida albicans.