Propolis merupakan salah satu produk alam yang dikumpulkan lebah dari getah pohon dan memiliki warna coklat kehitaman yang digunakan pada permukaan luar sarang untuk menghindari predator. Saat ini jenis lebah tanpa sengat yang populer di masyarakat adalah Heterotrigona itama. Produk lebah jenis Heterotrigona itama ini digunakan masyarakat sebagai pengobatan. Heterotrigona itama menghasilkan propolis dengan jumlah lebih banyak dibandingkan jenis lebah bersengat, namun potensinya masih belum banyak dieksplorasi. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui kandungan jenis propolis pada uji fitokimia kualitatif, kandungan fenolik total, kandungan flavonoid total dan aktivitas antioksidan Heterotrigona itama. Sampel propolis diekstraksi menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 99% dan dipekatkan sehingga menghasilkan ekstrak etanol propolis. Kemudian dilanjutkan dengan uji fitokimia secara kualitatif untuk mengidentifikasi senyawa-senyawa yang terkandung dalam sampel, pengukuran kandungan fenolik total, dan kandungan flavonoid total serta aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode DPPH. Hasil analisa fitokimia menunjukkan ekstrak propolis Heterotrigona itama mengandung karbohidrat, alkaloid, flavonoid, tanin, dan kumarin. Pengukuran kandungan fenolik total dan kandungan flavonoid total dari tertinggi ke terendah pada kotak satu yaitu propolis pintu keluar masuk sarang, propolis kantung madu, dan propolis jaring, sedangkan kotak dua yaitu propolis kantung bee pollen, propolis jaring, dan propolis pintu keluar masuk sarang. Pengujian aktivitas antioksidan berdasarkan nilai IC50 memperoleh hasil tertinggi ke terendah pada kotak satu yaitu propolis jaring, propolis pintu keluar masuk sarang, dan propolis kantung madu, sedangkan kotak dua yaitu propolis jaring, propolis pintu keluar masuk sarang, dan propolis kantung bee pollen. Disimpulkan bahwa sampel propolis Heterotrigona itama jaring berpotensi memiliki aktivitas antioksidan yang kuat sampai sangat kuat.
Kata kunci : Antioksidan, Fitokimia, Heterotrigona itama, Propolis, Kandungan Fenolik Total, Kandungan Flavonoid Total.