Tanaman singkong memiliki banyak manfaat. Hampir keseluruhan bagian dari tanaman singkong dapat dimanfaatkan. Singkong sebagai bahan baku energi alternative memiliki kadar karbohidrat sekitar 32%-35% dan kadar pati sekitar 83,8% setelah diproses menjadi tepung, dengan kandungan pati yang tinggi dalam singkong maka untuk menjadikan singkong sebagai bahan utama pembuatan bioetanol akan lebih baik. Penggunaan enzim amilase dan selulose adalah untuk menghidrolisis kandungan pati dan selulosa pada singkong. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh apakah proses hidrolisis dengan enzimatis rangkap menggunakan 2 enzim dapat mempengaruhi rendemen gula dari singkong gajah dan Untuk mengetahui jumlah kadar glukosa yang diperoleh dari proses hidrolisis enzimatis rangkap pada singkong gajah menggunakan enzim amilase dan selulase. Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 2 faktor dengan masing-masing 2 ulangan. Setiap perlakuan berisi 20 g. Faktor pertama adalah lama nya waktu saat hidrolisis enzim dengan waktu inkubasi 15 menit, 30 menit, 45 menit dan Faktor kedua adalah suhu yang dilakukan untuk inkubasi 30oC, 45oC, 60oC, dan 75oC. Proses hidrolisis enzimatis dengan menggunakan enzim selulase dan amilase menunjukkan hasil yang berbeda tidak nyata terhadap kadar gula pereduksi, sisa serat, dan kejernihan. Kadar gula pereduksi dengan Luff Schoorl berbeda nyata pada perlakuan suhu dan waktu sekitar 60oC di 15 menit (Tidak memenuhi syarat ANOVA dua arah). Kadar gula pereduksi dengan Luff Schoorl tertinggi dengan pengaruh waktu dan suhu adalah 15 menit (21,19%) dan di suhu 60oC (21,08%)