Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui keberadaan strain yeast potensial penghasil enzim lipase yang diisolasi dari Limbah Tandan Kosong Kelapa Sawit (TKKS) serta melakukan karakterisai dan pengujian analisis klaster. Penelitian ini menggunakan medium Yeast Extract Peptone Dextrose (YEPD) dengan tambahan antibiotik chloramphenicol dalam isolasi strain yeast dari limbah TKKS yang disampling dari tiga lokasi yang berbeda berdasarkan lama waktu TKKS di tempat pengolahan pabrik (1, 3, dan 30 hari). Strain yeast yang disolasi dan dimurnikan lalu dipilih sesuai dengan perbedaan karakteristik morfologinya. Kemudian dilakukan skrining menggunakan Tributyrin Agar Plate (TBA) medium pada strain yeast terpilih selama 48 jam dengan suhu 30o C. Zona bening (halo) yang terbentuk dihitung dengan rumus Enzymatic Index (EI). Lima strain yeast yang memiliki nilai EI tertinggi dianggap sebagai strain yeast potensial. Selanjutnya dilakukan pengamatan morfologi koloni antara lain bentuk, elevasi, tepi, konsistensi, permukaan, tekstur, warna, dan diameter koloni, serta pengamatan sel yaitu tipe budding dan ukuran sel dari lima strain yeast potensial tersebut. Data skoring karakteristik fenotip digunakan dalam konstruksi klaster Euclidean (dendrogram) menggunakan algoritma UPGMA (Unweighted Pair Group Method with Arithmetical averages) yang diolah dengan software MS. Excel dan MVSP (MultiVariate Statistical Package) dengan tujuan untuk mengetahui hubungan kekerabatan antara lima strain yeast. Hasil penelitian menunjukan bahwa kelima strain yeast potensial yang diisolasi dari substrat limbah TKKS menghasilkan enzim lipase dengan nilai EI tergolong medium dan memiliki karakteristik yang berbeda-beda. Strain yeast potensial dengan nilai EI yang didapat antara lain C.4.3.1 EI = 4,47; C.3.3.2 Ei = 4,14; C.3.1.1 EI = 3,72; D.3.3.1 EI = 3,59; dan C.1.2.2 EI = 3,43. Analisis klaster menunjukan adanya perbedaan jarak ketidaksamaan antar strain. Terdapat dua klaster besar yaitu klaster pertama (node 1) yaitu C.3.1.1 dan C.1.2.2, klaster kedua yang terdiri dari dua subklaster yaitu node 3 (strain C.4.3.1), dan node 2 (strain C.3.3.2 dan D.3.3.1).

Kata Kunci: Skrining, Lipase, Karakterisasi, Yeast, Klaster, Kelapa Sawit.