Uji aktivitas antibakteri ekstrak kasar dan fraksi-fraksinya dari akar rumput knop (Hyptis capitata Jacq.) terhadap Propionibacterium acnes telah dilakukan. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan aktivitas antibakteri dan fitokimia pada fraksi-fraksi hasil pemisahan dengan kromatografi kolom gravitasi dari ekstrak akar rumput knop (Hyptis capitata Jacq.), Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode sumur yang telah dimodifikasi dan fitokimia dilakukan dengan metode kromatografi lapis tipis. Hasil pemisahan kromatografi kolom ekstrak kasar diperoleh 19 fraksi (M1-M19). Hasil uji aktivitas antibakteri terhadap fraksi-fraksi diperoleh fraksi M1 yang dapat menghambat bakteri Propionibacterium acnes. Selanjutnya pemisahan kromatografi kolom dilakukan terhadap fraksi M1 dan diperoleh 5 fraksi (M1.1 –M1.5 ) berdasarkan uji aktivitas antibakteri M1.4 memiliki daya hambatan tertinggi dan diperoleh nilai MIC sebesar 12,5 ppm sedangkan hasil fitokimia M1.4 menghasilkan senyawa alkaloid dan steroid. Hasil penelitian ini menunjukan M1.4 dari ekstrak rumput knop berpotensi sebagai antibakteri.