Kebutuhan terhadap enzim lipase seiring waktu semakin bertambah, sehingga perlu adanya sumber daya yang potensial untuk menghasilkan enzim tersebut. Enzim lipase dapat diisolasi dari bakteri yang terdapat pada limbah sisa pembuangan Crude Palm Oil (CPO). Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh strain bakteri yang mampu menghasilkan enzim lipase serta mengetahui karakter spesies, dan karakteristik aktivitas enzim lipase dalam pertumbuhan strain terseleksi. Metode yang digunakan adalah penyamplingan secara purposive dan dilanjutkan dengan skrining bakteri penghasil lipase menggunakan medium tributyrin 1%. Setelah itu strain terseleksi di karakterisasi secara fenotip, genotip dan uji biokimia. Diperoleh 72 Strain bakteri yang mampu menghasilkan enzim lipase. Strain dengan indeks zona bening terbesar 0,567 adalah strain PYA SS118, dan strain dengan indeks zona bening terendah 0,024 adalah strain PYA S328. Hasil identifikasi menggunakan gen 16s rRNA strain PYA SS118 adalah tergolong sebagai bakteri Bacillus flexus. Enzim lipase yang dihasilkan memiliki pH optimum adalah pH 4 dengan aktivitas sebesar 0,12 U/mL, dan suhu optimum adalah 30 °C dengan aktivitas sebesar 0,15 U/mL. Pertumbuhan Bacillus flexus PYA SS118 tertinggi adalah 1,593 x 109 CFU/mL dan tercapai pada jam ke-24 dan aktivitas enzim tertinggi adalah 0,193 U/mL pada jam ke-24.