Makrozoobenthos merupakan invertebrata yang dapat dilihat dengan mata telanjang dan hidup di dalam dan sekitar bebatuan di dasar perairan. Makrozoobenthos pada umumnya tidak dapat bergerak dengan cepat, ukurannya besar sehingga mudah untuk diidentifikasi dan habitatnya di dalam dan di dasar perairan. Sebagai salah satu komponen dalam ekosistem, keberadaan Makrozoobenthos di Polder Air Hitam belum banyak di teliti, sehingga penulis berminat untuk melakukan penelitian di Polder Air Hitam Samarinda. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui jenis dan kelimpahan Makrozoobenthos yang terdapat di Polder Air Hitam. Penelitian dilaksanakan pada bulan Agustus-September 2019, penelitian ini dibagi menjadi dua tahap yaitu survey lapangan untuk pengambilan sampel dan analisis penelitian dilakukan di Laboratorium Kualitas Air. Pengambilan sampel bentos dan Substrat dilakukan pada tiga stasiun dan dilakukan tiga kali pengulangan, pengambilan sampel air diambil pada tiap-tiap stasiun yang telah ditentukan dimana sampel air diambil menggunakan botol sampel.Hasil pehitungan yang berbeda pada setiap stasiun dengan pengulangan yang berbeda chi2 hit 0,991 < chi2 tabel (0,05.,2)=5,991 berdasarkan hasil uji statistik yang digunakan dalam penelitian ini yaitu uji chi2 dimana uji digunakan untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan nyata antara 2 individu yang berbeda (populasi Pila ampullacea dan Melanoides torulosa). Hasil kesimpulan bahwa di Polder Air Hitam Kota Samarinda hanya ditemukan 2 jenis Makrozoobentos yaitu jenis Pila ampullacea dan Melanoides torulosa. Untuk jenis Pila ampullacea didapatkan kelimpahan 118-147 ind/m2 sedangkan untuk Melanoides torulosa 108-147 ind/m2 diantara 3 stasiun tersebut yaitu (Inlet, Tengah dan Outlet) ternyata tidak berbeda nyata.
Kata Kunci : Keanekaragaman, Makrozoobenthos, Polder Air Hitam.