Tanah hutan mangrove merupakan habitat dan sumber keanekaragaman dari mikroorganisme diantaranya adalah bakteri. Salah satu bakteri yang bermanfaat dalam bidang farmasi berasal dari kelompok Actinobacteria dimana memegang peranan penting dalam keanekaragaman hayati bakteri tanah. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi bakteri dari kelompok Actinobacteria dari tanah hutan mangrove sebagai sumber antimikroba. Sampel tanah diperoleh secara acak kedalaman 5-10 cm dari dua lokasi. Sampel tanah diberi perlakuan berupa pemanasan dengan suhu 60°C dan 100°C. Isolasi dilakukan dengan menggunakan metode sebar pada medium Starch Casein Agar (SCA). Isolat yang diperoleh dimurnikan dan dilakukan skrining aktivitas antimikroba dengan menggunakan agar plug method terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans, dan jamur Candida albicans. Isolat yang memiliki aktivitas antimikroba kemudian dikarakterisasi dengan pengamatan morfologi secara makroskopis dan mikroskopis, serta uji reaksi biokimia. Hasil penelitian menunjukkan bahwa diperoleh 96 isolat dimana 25 isolat termasuk dalam kelompok bakteri Gram positif dan 71 isolat termasuk dalam kelompok bakteri Gram negatif. Skrining aktivitas antimikroba dilakukan terhadap 25 isolat bakteri Gram positif yang diduga merupakan Actinobacteria. Hasil skrining aktivitas antimikroba menunjukkan bahwa terdapat 4 isolat aktif yaitu B1, B7, D7, dan F12. Isolat aktif dikarakterisasi dengan melakukan pengamatan morfologi dan uji reaksi biokimia. Berdasarkan karakteristik yang diperoleh diduga isolat B1 dan F12 adalah genus Brevibacterium, isolat B7 adalah genus Arthrobacter, dan isolat D7 adalah Streptomyces.
Kata Kunci: Actinobacteria, Isolasi, Karakterisasi, Agar Plug Method, Hutan Mangrove