Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui teknik isolasi fungi endofit dari daun Tapak Dara, karakterisasi makroskopik dan mikroskopik, profil KLT dari isolat fungi, serta data isolat senyawa alkaloid dari fungi endofit daun Tapak Dara dengan menggunakan Spektrofotometer Ultraviolet Visible. Isolasi menggunakan metode sterilisasi permukaan (Surface Sterilization) dan tanam langsung (Direct Seed Planting) pada media Potato Dextrose Agar (PDA) hingga diperoleh isolat fungi endofit yang murni. Pada karakterisasi makroskopik mengamati bentuk dan warna koloni secara visual dan karakterisasi mikroskopik dengan mikroskop. Ekstrak isolat diidentifikasi pada KLT kemudian disemprot pereaksi dragendorff lalu diidentifikasi isolat senyawa alkaloid dengan spektrofotometer UV-Vis. Hasil penelitian diperoleh satu isolat fungi endofit dari daun Tapak Dara dengan teknik sterilisasi permukaan menggunakan alkohol 70% selama 1 menit, natrium hipoklorit 5,25% selama 3 menit, diakhiri dengan aquades steril 30 detik menghasilkan frekuensi pertumbuhan koloni sebesar 58%. Secara makroskopik fungi berbentuk melingkar teratur, tampak depan dan belakang berwarna putih, tepi rata dan nampak, dan permukaan halus seperti kapas, ditemukan hifa bersepta, hifa uninukleat, spora, dan sporangium. Hasil identifikasi subfraksi C-9 menggunakan kloroform:metanol (1:3) mengandung senyawa alkaloid. Hasil dari data Spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 230 nm menghasilkan absorbansi tertinggi sebesar 3,967.